**293T细胞培养指南**

293T细胞原名293tsA1609neo，是通过将SV40T抗原的温度敏感基因插入到293（HEK-293）细胞株中而形成的一种高转染衍生株。

一、细胞基本信息

• 细胞名称：人胚肾细胞
• 细胞别名：Hek293T; HEK-293T; HEK293T; HEK-293-T; 293-T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
• 种属来源：人
• 组织来源：肾
• 细胞形态：上皮细胞样
• 生长特性：贴壁生长
• 培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S
• 传代比例：1:2至1:4，每2-3天更换培养基
• 培养条件：气相：95%空气 + 5%二氧化碳，温度：37℃
• 冻存条件：冻存液：60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO；存储条件：液氮
• 安全性：建议在二级生物安全台内进行操作，并做好个人防护。

二、复苏及传代方法

1. 细胞株复苏（冻存管）

1. 将冻存管在37℃水浴中迅速完全融化，适当轻轻摇晃以促进融化，快速融化可提高细胞复苏效果。
2. 使用75%酒精擦拭冻存管外壁。
3. 将完全融化的细胞离心或转移至无菌的15ml或其他合适无菌离心管中，进行400g离心5分钟，吸去上清液，注意保留细胞沉淀。然后用新鲜的完整培养液重悬后转移至培养器皿中，混匀，放入CO2培养箱于37℃培养。
4. 第二天根据细胞贴壁和生长状态更换培养液。注意：若无法及时复苏，需将冻存管存放于-80℃或液氮中，以便尽快复苏培育。

2. 细胞株复苏（T25瓶）

1. 移除T25瓶的外包，使用75%酒精擦拭瓶外壁。
2. 在倒置显微镜下观察细胞状态，确认无异常后，使用移液器移除多余的培养液，放置于CO2培养箱内于37℃条件下培养过夜。
3. 第二天依据细胞的贴壁和生长状态，决定是否更换培养液或进行传代，传代比例参考1:2至1:4。

三、注意事项

1. 每支冻存管大约含有1×10⁶个细胞，体积为1ml，预期存活率为60-90%。建议复苏至1个T25瓶或1个6cm培养皿中。如存活率较低，可消化后转移至35cm培养皿/T125瓶中，以促进细胞生长。
2. 若本产品在常温运输且为培养瓶中充满完整培养基的贴壁细胞，收到后需及时记录有无漏液或瓶身损坏；用75%酒精擦拭瓶表面，显微镜下观察细胞状态。不要立即打开培养瓶，让细胞在培养箱内静置2至4小时以稳定状态；完成后，取出瓶，镜检并记录。
3. 若细胞密度超过85%，应尽快进行传代；如悬浮细胞较多，可在培养箱中静置过夜以促其再次贴壁。若是常温运输的离心管装的悬浮细胞，可直接转移至培养皿或瓶中培养。若培养基颜色正常，则保留原培养液并在首次更换时保留一半，并添加一半新鲜培养液，以避免因培养基或血清差异影响细胞生长，确保细胞良好状态。
4. 细胞培养需在生物安全柜内进行，并严格遵循无菌操作规范。

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