金年会金字招牌诚信至上推出的这款检测试剂盒,基于探针法荧光定量PCR的原理进行开发,具有许多显著的特点,能够满足不同用户的需求。
产品特点
本产品包含以下特点:
- 即开即用,用户仅需提供样品DNA模板。
- 经过优化的引物及其他组分,具备高灵敏度。
- 提供阳性对照,有助于识别假阴性样品的出现。
- 特异性高,引物设计依据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域,避免与其他生物样本DNA发生交叉反应。
- 可同时用于定性及定量检测,定量检测时的线性范围至少为五个数量级。
- 本产品足够支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品仅限于科研用途。
使用方法
使用方法如下:
一、DNA提取(样本制备区)
使用用户自选的方法提取和纯化样品DNA,本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品(样本制备区)
请在独立区域进行稀释操作,以避免污染样品或其他试剂组件:
- 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
- 使用带芯枪头添加45μL DEPC-H2O。
- 在7号管中加入5μL阳性对照,充分震荡1分钟,得到1×10E7拷贝/μL的标准样品,放冰待用。
- 依次稀释,直到获得6个不同稀释度的标准样品。
如不需制作标准曲线,只需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。
三、试剂配制(试剂准备区)
根据待测样品数量准备相应的qPCR管,并加入各组分,具体步骤请参考详细说明书。
四、添加模板(模板添加区)
向qPCR管添加2μL模板,添加顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板、阳性对照,离心30秒后进行扩增反应。
五、扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置在扩增仪器中,按照说明书中的扩增程序进行操作。
六、结果分析
如制作标准曲线,绘制标准曲线并推算样品DNA浓度。如未制作标准曲线,判定结果如下:
- 阳性对照:Ct值<30,明显指数增长。
- 阴性对照:Ct值38或无Ct值,无明显增长。
- 样本检测:Ct值<35为阳性,Ct值38或无为阴性,Ct值在35-38应复检。
运输及保存
金年会金字招牌诚信至上建议低温运输,-20℃保存,保存期限为一年,阳性对照需单独存放,避免污染其他试剂。