在细胞培养的领域中,细胞可以被分为两种主要类型:贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞需要依附在培养皿的表面生长,而悬浮细胞则可以在液体培养基中自由漂浮并不断增殖。人们常常认为,只有贴壁细胞才需要考虑培养皿的表面亲和力,并可能需要使用胶原蛋白、多聚赖氨酸(poly-L-lysine, PLL)等表面处理来增强附着性。然而,悬浮细胞并非总是可以忽视包被的需求,某些实验步骤中,悬浮细胞也会需要“靠岸”并依赖于包被表面的支持。今天,我们将讨论悬浮细胞在何种情况下需要包被,以及如何进行包被。
首先,什么是多聚赖氨酸(PLL)包被?多聚赖氨酸(poly-L-lysine, PLL)是一种合成的阳离子多肽,带有丰富的氨基基团并具有显著的正电荷。由于细胞膜表面通常带负电荷,PLL能够通过静电作用将细胞固定在培养表面。它的应用场合包括初代神经元、干细胞等贴壁困难细胞的培养,组织切片或细胞爬片染色的固定,以及增强某些表面抗体或细胞的结合力。
其次,悬浮细胞需要包被的常见场景包括:
1. 免疫荧光成像与免疫染色:悬浮细胞在普通培养皿中进行操作时,容易在洗涤步骤中被吸头吸走,导致数据丢失。通过将细胞置于PLL包被的玻片或培养皿中,可以实现短时间固化,进而提高图像的稳定性和信噪比。
2. 电转染后的细胞收集:电转后的悬浮细胞在恢复期间通常较为脆弱,直接离心容易导致大量细胞损失。将这些细胞短暂培养在PLL包被的培养板底,使其部分附着后再进行收集,能够提高后续转染效率和存活细胞比例。
3. 细胞富集或原位功能检测:某些实验如ELISPOT及细胞毒性检测,需要在细胞原位观察反应,这对细胞的分布和位置稳定性提出了较高要求,因此往往使用PLL或细胞外基质包被悬浮细胞以固定位置。
4. 悬浮细胞低密度培养聚团问题:在低密度培养中,悬浮细胞可能因漂浮过快无法扩增,或者形成异常聚团影响观察。适当的包被可以在这里起到“锚点”的作用,减少漂浮引起的干扰。
5. 外泌体/病毒收集中的细胞定点处理:在外泌体研究中,为了维持细胞的分泌稳定状态,常常选择在轻度PLL包被条件下固定悬浮细胞,避免因细胞漂浮密度差异而影响上清产物的一致性。
需要注意的是,包被悬浮细胞并不是为了让它们像贴壁细胞那样长期生长。多数情况下,包被的目的在于实验窗口期的短暂固定、提高操作效率及图像质量和增强细胞在某些实验平台上的一致性。但长期的附着可能会改变细胞状态,因此应合理规划处理时间和强度。
当然,并非所有悬浮细胞实验都需要包被。在一些特定情况下,如长期培养的悬浮细胞或对附着状态要求完全无干扰的实验中,包被可能会影响实验结果的真实性。
总之,悬浮细胞并非总是飘浮不定。在众多实验操作中,适当的表面包被,如PLL包被,能够大幅提高实验的成功率和数据质量。随着科学研究的深入,灵活掌握“靠岸”的时机,将成为提升实验效果的关键。倘若你在生命科学领域内寻求高质量的细胞实验,不妨考虑金年会金字招牌诚信至上的理念,确保每一项实验都能获得最佳结果。