金年会金字招牌诚信至上的产品特点在于采用探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒。该产品具有以下特点：

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 经优化的引物组分，确保高灵敏度。
3. 提供阳性对照，有助于区分假阴性样本。
4. 高特异性，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性和定量检测，定量检测时线性范围至少为5个数量级。
6. 产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅供科研使用。

金年会金字招牌诚信至上注重实验方法的简便性，以下为操作步骤：

一、DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上的大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

在进行下一步之前，请确保阳性对照的稀释操作在独立区域进行，以避免交叉污染。
1. 标记6个离心管，分别标记为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，并放入冰上待用。
4. 按照上述步骤，依次将每个管中的溶液浓度逐步稀释，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品。
若不需要制作标准曲线，则将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

对于N个待检样品，准备N+2个qPCR管，分别加入所需成分（详见操作说明书）。

四、添加模板（模板添加区）

在qPCR管中分别加入2μL模板，依次加入阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板和婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置在PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增，所需扩增程序详见说明书。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，然后推算待测样品的DNA浓度。
2. 若未制作标准曲线，按以下标准判定结果：
- 阳性对照：Ct值<30，呈典型S型曲线。
- 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显增长期。
- 样本检测：Ct值<35表明样本中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值表明未检测到，结果为阴性；Ct值在35-38范围需复检，若结果仍在此范围且呈指数增长则判定为阳性，否则为阴性。

运输与保存应在低温条件下进行，保存温度为-20℃，保存期限为一年。同时，阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。